广州高速冷冻离心机的分离方法介绍-湖南湘立

　　当混合物中的溶质颗粒很小并静止不动时,仅利用重力的作用来观察它们的沉降速度是不可能的,就必须人为的模仿重力场的作用加在颗粒上,加快沉降的速度,用适当的时间达到沉降目的.这种人为的力就是旋转物体所受的离心力,只要我们控制离心的转速和颗粒在运动中至中心轴的距离,就可以控制颗粒所受的离心力,这样就可以使颗粒按照我们的要求进行沉降.实现这一过程(离心原理)的设备就是离心机。高速冷冻离心机分离的方法：

　　1. 顺序浮选法：

　　a) **速法：较早使用的方法，4000rpm×24hrs×3次，10°CNaCl+NaBr梯度按1。006，1。063，1。21顺序浮选，每次在管上部取出不同密度之脂蛋白。操作简单，分辨率高，得率高，费时，成本高。

　　b) **高速法：100，000rpm×2.5hrs×2次，10°C, 100，000rpm×4hrs×1次，NaCl+KBr+EDTA梯度按不含密度浮选出VLDL ，LDL，HDL

　　2. 单次离心法：

　　a) 单次水平分离

　　用较高转速为25，000~28，000 rpm,6×40ml甩平转头以1.006g/ml NaCl液及1。35g/ml(NaCl+KBr+EDTA)液配置成从 1。006至1。21的8层不

　　连续阶梯度，较下部用血清与KBr配成1。25g/ml样品液，25，000rpm×4hrs,4oC一次得到VLDL，LDL，HDL不同层区带。

　　用较高转速为40，000 rpm ，6×13ml甩平转头，40，000 rpm×24hrs，20°C，不连续KBr梯度1.006~1.21g/ml,细长管，分层清晰，回收率高，离心时间长

　　b) 单次垂直管分离：

　　NaCl/KBr或NaCl/NaBr不连续梯度单管容量从5ml到40ml，转速从50，000 rpm~80，000 rpm，离心(0。5-3)hrs,下层用KBr或(NaBr)将血清调至1。3g/ml上层用1.006g/ml,NaCl液，10°C-20°C，增加，减速一次分出。 NaCl/Sucrose不连续梯度下层为48%W/W Sucrose,中层血清在4MnaCl中，上层为0。67M NaCl+0.05% EDTA,离心参数同上，时间较长。

　　物体受到的重力就是由于地球吸引而产生的,重力的方向总是向下的,所以地球表面是一个重力场,物体受重力的作用有高处向低处降落,这就是重力沉降现象.根据力学定律,物体和混合物中的溶质颗粒下沉的快慢和它们本身的质量大小成正比。这就是离心机分离材料的原理由来。

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